EHA101 Chemically Competent Cell 農桿菌化學感受態(tài)細胞

產品標簽：

EHA101菌株；農桿菌感受態(tài)細胞；Rifampicin（Rif） li福平；Kanamycin（kan）卡那mei素； EHA105；LBA4404；GV3101；AGL1；植物轉基因研究；

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產品描述：

EHA101菌株的染色體背景為C58，核基因含li福平抗性基因rif，為了便于轉化操作，此菌株攜帶一無自身轉運功能的胭脂堿型Ti質粒pEHA101（pTiBo542DT-DNA），此質粒含有vir基因（vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件，pEHA101（pTiBo542DT-DNA）質粒自身的T-DNA轉移功能雖被破壞，但可以幫助轉入的雙元載體T-DNA順利轉移）。pEHA101（pTiBo542DT-DNA）質粒攜帶篩選標簽kan，賦予EHA101菌株卡那mei素抗性，適用于玉米、水稻、煙草等植物的轉基因操作。

我司提供的EHA101化學轉化感受態(tài)細胞經特殊工藝制作，基因型為C58 (rif^R) Ti pEHA101 (pTiBo542D T- DNA) (kan^R) Nopaline，經pK7WGF2質粒（壯觀mei素抗性）檢測轉化效率>10⁴ cfu/μg DNA。

根癌農桿菌介導的轉化原理：

根癌農桿菌能在自然條件下趨化性的感染大多數雙子葉植物或裸子植物的受傷部位，誘導產生冠癭瘤。誘發(fā)冠癭瘤的原因在于根癌農桿菌Ti質粒上的T-DNA含8個左右的基因能在植物細胞內表達，指導合成一種非常特殊的化合物冠癭堿，進而引發(fā)轉化細胞癌變；根癌農桿菌Ti質粒（150～200kb）上的一段T-DNA，隨著農桿菌侵染植物傷口進入細胞后，T-DNA脫離質粒并整合到植物基因組。因此，將外源基因插入到改造的T-DNA中，借助農桿菌的感染作用，從而達到將外源基因轉化并整合進入受體植物的目的。

Ti質粒的類型：

根據根癌農桿菌誘導的植物冠癭瘤中所合成的冠癭堿種類不同，Ti質粒可分為4種類型：章魚堿型(octopine)、胭脂堿型(nopaline)、農桿堿型(agropine)、農桿菌素堿型(agrocinopine)或稱為琥珀堿型(succinamopine)。章魚堿和胭脂堿是由氨基酸衍生的冠癭堿，而農桿堿和農桿菌素堿是屬于單糖衍生的冠癭堿。各種不同類型的Ti質粒都具有控制腫瘤誘發(fā)的且物理位置彼此相鄰的T-DNA區(qū)和毒性區(qū)(Vir區(qū))，它們約占Ti質粒DNA總長度的1/3。

產品組分：

注意事項

9）   為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

1)        取-80℃保存的感受態(tài)細胞于室溫或手心片刻待其部分融化，達到冰水混合狀態(tài)時插入冰浴中使其*融化。

2)        往100μl感受態(tài)細胞懸液中加入1μg（體積不大于10μl）目的DNA，用手管底使其混勻，依次于冰上靜置5min，液氮5min，37℃水浴5min，冰浴5min。

3)        加入700μl無抗生素的LB或YEB液體培養(yǎng)基，于28℃振蕩培養(yǎng)2-3h。

4)        6,000rpm離心1min，吸掉600ul上清，之后用槍輕輕吹打重懸菌體。之后加到含相應抗生素的LB或YEB平板上，用無菌玻棒輕輕的將細胞均勻涂開。室溫正置10 min，待液體被吸收后，倒置平板，28℃培養(yǎng)2-3天。

【注意】：當平板只含轉化所用雙元載體抗生素時，28℃培養(yǎng)48h即可；當平板中加入雙元載體抗生素的同時，再加入20μg/ml li福平時，需28℃培養(yǎng)60h；若使用的平板含50μg/ml li福平，需在28℃培養(yǎng)72-90h。

— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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